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亲和柱净化步骤

注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥!

----3mL柱管取出上方堵头，减去上堵头螺纹下突出部分，插回柱子上，另一端与20mL针筒固定后使用;将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断，然后再插回柱子上(柱管内偶见有小气泡属正常现象，不影响亲和柱的使用);

----准确移取上述混匀滤液，注入针筒中，调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过亲和柱;

----用20mL 水冲洗柱子(对于饲料及玉米加工副产品等颜色较深的样液，先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗，再用10 mL 10%水冲洗柱子，之后用10mL水冲洗柱子。)，流速1秒/滴，弃去流出液，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体;

----准确加入1.5mL(色谱级)洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，进行相关测定。

亲和柱亲和层析技术原理

IAC也是色谱技术的一种,可称为色谱技术,是一种利用抗原特异性可逆结合特性的SPE技术,根据抗原的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将与惰性微珠共价结合,然后装柱,将抗原溶液过亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,然后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原,用适当的缓冲液和合适的保存方法,柱可以再生备用。其提纯效率很高,通常只需一次就可达到1000～10000倍的纯化效果(王泽永,2002)。

亲和柱亲和层析的基本原理

亲和层析是一种吸附层析，抗原（或）和相应的（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。

所以将抗原（或）固相化后，就可以使存在液相中的相应（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。此法具有有效、快速、简便等优点。

亲和柱——亲和层析的分离原理

生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性，如抗原与***，酶与底物或***，与受体等，这种结合往往是专一的而且是可逆的，生物分子间的这种结合力称为亲和力，亲和层析的分离原理简单地说就是通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性的基质（也称载体）上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。被固定在基质上的分子称为配体，配体与基质共价结合，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂，蛋白质的生物特异性可以帮助选择特异性的配体，一般是目的蛋白质与配体结合而不吸附杂质。蛋白质吸附后再利用洗脱液的快速变换和加入竞争剂的方法进行洗脱。