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发布时间:2022-01-27 07:25:07
什么是***盒?
ELISA***盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测***盒、ELISA Kit、酶联***盒、酶联吸附测定***盒、酶联分析***盒、酶免***盒等,比较常见的叫法是ELISA检测***盒、酶联吸附测定***盒等。
ELISA***盒自从60-70年代问世以来,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。
ELISA***盒的测试要求
做好对照
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应。
实验条件的选择
在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被(或抗原)的选择:将(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3)酶标记工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致***作用,应注意防护。有条件者应使用不致***、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
Elisa***盒操作步骤
1.用盖片镊Elisa***盒将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将Elisa***盒培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及细胞化学检测。
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