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亲和柱亲和层析过程中需要注意哪些？

由于亲和吸附达到平衡比较慢，所以特异性洗脱往往需要较常的时间和较大的洗脱条件，可以通过适当的改变其它条件，如选择亲和力强的物质洗脱、加大洗脱液浓度等等，来缩小洗脱时间和洗脱体积。

非特异性洗脱选择洗脱液的pH、离子强度时应注意尽量不影响待分离物质的活性，而且洗脱后应注意中和酸碱，透析去除离子，以免待分离物质丧失活性。

亲和柱——亲和层析的原理

通常，在开始亲和层析前需要预***行全细胞提取物的粗制，例如细胞裂解液，生长培养基。

首先将固定相装入带有流动相的色谱柱中，其中含有某类特定的生物大分子（从DNA到蛋白质，取决于实验需求）。等待一段时间使两相充分混合，随后将洗涤缓冲液倒入色谱柱中。洗涤缓冲液通过***非目标生物分子与固定相的较弱结合来去除非目标生物分子。目标生物分子对固定相具有较高的亲和力，因此能够保持与固定相的结合，而不会被洗涤缓冲液冲走。然后将洗脱缓冲液倒入含有剩余目标生物分子的色谱柱中。洗脱缓冲液比洗涤缓冲液，能够从更大程度上减弱靶生物分子与固定相之间的相互作用，从而洗脱靶生物分子。洗脱得到的溶液包含洗脱缓冲液和目标分子，称为洗脱液。

固定相一般是凝胶基质，常见的有琼脂糖。为了防止目标分子与配体结合过程中的空间干扰或重叠，首先将含有烃链的***连接到琼脂糖珠（固体支持物）上。这种具有烃链的***通常被称为琼脂糖珠和靶分子之间的间隔基。

亲和柱——亲和层析的应用

抗原和利用抗原、之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上，就可以从中分离其对应的。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低，用离子交换、凝胶过滤等方法都难于进行分离，而亲和层析则是一种非常有效的方法。将所需蛋白质作为抗原，经动物后制备，将与适当基质偶联形成亲和吸附剂，就可以对发酵液中的所需蛋白质进行分离纯化。抗原、间亲和力一般比较强，其解离常数为108－10?12M，所以洗脱时是比较困难的，通常需要较强烈的洗脱条件。可以采取适当的方法如改变抗原、种类或使用类似物等来降低二者的亲和力，以便于洗脱。

另外金***球菌蛋白A（ProteinA）能够与球蛋白G（IgG）结合，可以用于分离各种IgG。