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发布时间:2022-04-18 10:02:48
ELISA***盒的制备方法
包括以下步骤:
1)抗原表位的计算机筛选;
2)抗原的制备;
3)采集;
4)间接ELISA方法的建立;
5)间接ELISA方法的敏***和特异性验证;
6)***盒的稳定性验证;
7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的***盒能有效检出戊型病毒,适用于大批量发病样本的检测,可用于猪戊肝的快速诊断,并预防、控制猪戊病毒的流行和阻断戊病毒由猪向人传播。
Elisa***盒技术原理
(1). 抗原或的固相化及抗原或的酶标记。
(2). 结合在固相载体表面a的抗原或仍保持其活性。
(3). 酶标记的抗原或既保留其活性,又保留酶的活性。
(4). 受检标本与固相载体表面的抗原或起反应。再加入酶标记的抗原或,也通过反应而结合在固相载体上。
(5). 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
(6). 加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平),并且重复性好。以反应为基础,将抗原、的特异性反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏***很高的试验技术。
Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案
重复性不佳,高CV值
1 样品不均一 加样前充分混匀样品,取样确保移液位置一致;
2 包被板表面遭到*** 洗板加样时尽量小心,避免***板的包被表面
3 孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作,避免孔与孔的污染;封板膜不能重复使用
4 加样量不一致 样品稀释前应充分混匀,尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴
5 边缘效应(外周孔显色较中心孔深) 孵育时尽量100 rpm旋转混匀
6 微量加样不准确 保证微量加样的准确性和均一性
7 不正确的洗涤 洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,确定每一步的洗涤
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