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发布时间:2022-04-29 13:27:16
ELISA***盒的制备方法
包括以下步骤:
1)抗原表位的计算机筛选;
2)抗原的制备;
3)采集;
4)间接ELISA方法的建立;
5)间接ELISA方法的敏***和特异性验证;
6)***盒的稳定性验证;
7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的***盒能有效检出戊型病毒,适用于大批量发病样本的检测,可用于猪戊肝的快速诊断,并预防、控制猪戊病毒的流行和阻断戊病毒由猪向人传播。
ELISA***盒的成分
1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T
2 酶标记: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 1
3 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 1
5 标记稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 1
6 显色剂: TMB底物液 15mL x 1
7 终止液: 1N*** 12mL x 1
8 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但***盒没有提供) (450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性***管(用于浓缩酶标记和显色剂)
ELISA***盒的分类
检测***及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,保证实验结果的重复性。
Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案
背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
1 洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留 洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,彻底拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。
2 底物污染,未避光保存,出现颜色 弃去底物,重新配置
3 样品稀释液污染 弃去稀释液,重新配置
4 吸头重复使用,未洗净或消毒不彻底 吸头尽可能一次性使用
5 不正确的孵育时间,温度(尤其是底物孵育的时间) 常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。完全按照说明书要求。
6 偶联***(strept***idin-HRP)浓度过高 按照说明书调整到合适的浓度
7 ELISA板子不正确的贮存 酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板
8 没有正确封闭 在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间
9 样本溶血严重 建议使用非溶血或轻微溶血样本,严重溶血样本会导致背景偏高。
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