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发布时间:2022-06-03 16:17:17
ELISA***盒的制备方法
包括以下步骤:
1)抗原表位的计算机筛选;
2)抗原的制备;
3)采集;
4)间接ELISA方法的建立;
5)间接ELISA方法的敏***和特异性验证;
6)***盒的稳定性验证;
7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的***盒能有效检出戊型病毒,适用于大批量发病样本的检测,可用于猪戊肝的快速诊断,并预防、控制猪戊病毒的流行和阻断戊病毒由猪向人传播。
ELISA***盒——会出现的问题及解决办法
吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因:室温太高(>25℃)。
解决办法: 若无法降低室内温度,请适当缩短步骤4的温育时间。
b.原因:底物溶液受到污染。
解决办法: 若发现底物溶液已呈现淡蓝色,请不要再使用。
c.原因:反应时间超过太久。
解决办法:请控制反应时间。
d.原因:酶标记物污染了盒内其它***。
解决办法:使用过的吸头应立即丢弃,可避免***间相互污染,凡是***(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡,再以清水冲洗干净,可确保无残留)
Elisa***盒实验原理
将目标包被于微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的结合,然后加入微生***的目标,将未结合的生物素洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的***。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
Elisa***盒操作步骤
1、固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。
2、包被或抗原的挑选:将或抗原吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。
3、 酶标记作业浓度的挑选:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法',在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。
4、酶的底物及供氢体的挑选:对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。
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