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发布时间:2022-06-08 13:32:29
Elisa***盒实验原理
将目标包被于微孔板中,制成固相载体,向微孔中分别加入标准品或标本,其中的目标连接于固相载体上的结合,然后加入微生***的目标,将未结合的生物素洗净后,加入HRP标记和亲和素,再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的***。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),计算样品浓度。
Elisa***盒注意事项
Elisa***盒解冻与存放:-20℃取出后建议放入2~8℃冰箱中解冻约,每隔一段时间轻轻摇晃均匀,不可直接放入温度较高处解冻,避免因温度改变太大,造成蛋白质凝集而出现沉淀,其质量下降。若短期无法用完一瓶,建议无菌分装,再放回冷冻,避免反复冻融。4℃长时间保存后的变性脂蛋白及纤维蛋白,形成絮状物质变差。
Elisa***盒的注意事项
Elisa***盒是否灭活:加热可灭清中补体系统,在较少数情况下(培养ES细胞,平滑肌细胞时)建议灭活,在培养其余细胞时不建议灭清。灭活非常容易产生沉淀,如必须灭活请按56℃,30 min,轻微摇晃原则操作,灭活温度高、时间长、摇晃不均都容易产生沉淀。
Elisa***盒培养基:无培养基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势,但是,仍然是培养液中基本的添加物,尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时,常常会先使用有的培养液进行培养,待细胞生长旺盛后再换成培养液。
Elisa***盒的操作注意事项
洗刷是ELISA***盒操作过程中决议实验胜败的一个关键步骤。目的是除掉未结合的反响物,间断抗原***反响,除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。
断定效果须运用Elisa***盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,根据反响液颜色的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。具有杰出的重复性。
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