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发布时间:2022-06-10 00:45:58
ELISA***盒——会出现的问题及解决办法
阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。
a.原因:微孔中的***未能充分混合。
解决办法: ***加完后,需轻敲盘四周使其充分混合均匀。
b.原因:洗板过程发生问题。
解决办法:请随时监控洗板过程,洗完后立即进行下一步骤。
c.原因:添加样品或酶标记物的量不一致。
解决办法:请使用已校正过的移液枪,并确保其与吸头之间有高度密合性。
Elisa***盒操作步骤
1、固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。
2、包被或抗原的挑选:将或抗原吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。
3、 酶标记作业浓度的挑选:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定。然后再固定其它条件或采取“方阵法',在正式试验体系里准确地滴定其作业浓度。
4、酶的底物及供氢体的挑选:对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。
ELISA***盒主要实验原理
·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相载体表面,原因是蛋白质和聚乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反应等活性;
·标记:抗原或者可通过共价键与酶连接成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其活性和酶的催化特点;
·显色:酶结合物与相应包被在固相载体的抗原或者结合后,也被固定在固相载体上,加入酶的底物之后可出现显色反应,根据反应的颜色深浅可计算抗原或者的相对含量。
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