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ELISA***盒的测试要求

做好对照

正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应。

实验条件的选择

在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括:

（1）固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

（2）包被（或抗原）的选择：将（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg/ml等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

（3）酶标记工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定（见酶标记部份）。然后再固定其它条件或采取“方阵法”（包被物、待检样品的参考品及酶标记分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

（4）酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致***作用，应注意防护。有条件者应使用不致***、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

ELISA***盒——ELISA实验通用规则

1、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

Elisa***盒的注意事项

Elisa***盒是否灭活：加热可灭清中补体系统，在较少数情况下（培养ES细胞，平滑肌细胞时）建议灭活，在培养其余细胞时不建议灭清。灭活非常容易产生沉淀，如必须灭活请按56℃，30 min，轻微摇晃原则操作，灭活温度高、时间长、摇晃不均都容易产生沉淀。

Elisa***盒培养基：无培养基在结果重复性、细胞体外分化方面有优势，但是，仍然是培养液中基本的添加物，尤其是在原代培养或细胞生长状态不良时，常常会先使用有的培养液进行培养，待细胞生长旺盛后再换成培养液。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

样品或标准品OD超出正常范围

1  错误的样品或标准品的稀释  完全按照说明书稀释

2  偶联***浓度过高  按照说明书调整到的浓度

3  TMB底物孵育时间过长  调整到合适的孵育时间

4  样品或标准品污染  避免污染

5  错误的孵育时间或温度