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ELISA***盒的应用技术

ELISA检测***盒应用定性夹心检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM，这些就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与孵育结合上的HEV IgM相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入***溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgMelisa***盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

ELISA***盒的特点

一、灵敏、特异的***；

二、稳定的重复性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；

四、适用血浆、***匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；

五、节省实验经费。

elisa***盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为29.8mg/L，则认为回收率为99%。

Elisa***盒——Elisa实验常见问题及解决方案

重复性不佳，高CV值 

1  样品不均一 加样前充分混匀样品，取样确保移液位置一致；

2  包被板表面遭到*** 洗板加样时尽量小心，避免***板的包被表面

3  孔与孔之间的交叉污染 孵育后取下盖子小心操作，避免孔与孔的污染；封板膜不能重复使用

4  加样量不一致 样品稀释前应充分混匀，尽可能使用同一移液器并装紧吸嘴

5  边缘效应（外周孔显色较中心孔深） 孵育时尽量100 rpm旋转混匀

6  微量加样不准确 保证微量加样的准确性和均一性

7  不正确的洗涤 洗液准确配制；充分洗涤，静置15秒，确定每一步的洗涤